Taq polimerasi , un enzima più comunemente usato nella reazione a catena della polimerasi ( PCR ) , è stato isolato da Thermus aquaticus . Questi microrganismi thermophillic vivono in acque termali a temperature di 70-73 ° C. La Taq polimerasi usata oggi è isolato da un ceppo YT – 1 , una cultura di T. aquaticus raccolti da funghi di primavera , una grande primavera nel Lower Geyser Basin . Immobili

Full-length Taq polimerasi ha 832 aminoacidi e un peso molecolare di 94.000 dalton . Ha una attività specifica di 292.000 unità , con ogni unità aggiungendo 10 nmoli di deossiribonucleotide trifosfato ( dNTP ) in un prodotto in 30 minuti . Taq polimerasi è stato il primo trovato per mantenere la sua attività, dopo esposizione ad alta temperatura . Più specificamente , Taq polimerasi ha un’attività emivita di 45 a 50 minuti a 95 ° C e di 9 minuti a 97,5 ° C.

Attività

ottimale attività di polimerizzazione di Taq è a temperature di 80 ° C , in presenza di 55 mM KCl e 2 mM MgCl2 e un pH di 9,4 .

Application

il fattore più importante che contribuisce alla popolarità di Taq polimerasi nella PCR è la sua capacità di funzionare in e resistere ad una temperatura elevata . Questa struttura ha reso ideale per la PCR , che richiede una temperatura elevata per denaturare il DNA a doppio filamento . Una PCR è composto di ben 40 cicli , e la temperatura di ogni ciclo varia da circa 50 a 95 gradi C. Escherichia coli (E. coli ) DNA polimerasi , usata per PCR prima l’isolamento di Taq , distrutta a elevato temperatura e doveva essere rifornito dopo ogni fase di denaturazione . Ciò ha aumentato il tasso di errore e le possibilità di contaminazione incrociata nella PCR . L’uso di Taq polimerasi in PCR ha semplificato non solo la tecnica ma anche migliorato la sua specificità , resa e sensibilità . A causa della sua diffusione e importanza nel campo della biologia molecolare , la rivista ” Science ” di nome Taq polimerasi ” Molecule of the Year” nel 1989 .

Limitazione

exonuclease capacità di correzione di bozze è assente in Taq polimerasi . Ciò significa che Taq ha bassa fedeltà replica , in quanto non può correggere eventuali errori che possono verificarsi durante l’amplificazione . Questi errori limitano l’uso di Taq polimerasi dove è richiesta elevata precisione .