Come fare il gel di poliacrilammide

Sebbene sia possibile utilizzare gel di poliacrilammide per la separazione del DNA , che sono più adatti per la separazione e caratterizzazione delle proteine ​​. Essi sono ampiamente utilizzati per studiare peso molecolare , carica , la struttura e la purezza delle proteine ​​. La mobilità elettroforetica delle proteine ​​permette loro viaggiano attraverso la rete di polimeri di acrilammide quando viene applicata una corrente . Le proteine ​​si separano in base alle loro size.Things che ti serviranno
Lastre di vetro
Comb
Spacer
Pinze
Siringa
Guanti di protezione
150 mL pallone
26,6 ml di 29 % acrilamide più 1 % N , N - Methylenebisacrylamide
52,7 ml di acqua
20 ml di 5X Tris /BorateEDTA ( TBE ) Buffer
0,7 mL del 10 % ammonio Persulfate
35 microlitri di TEMED

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Indossare guanti . Pulire e asciugare l' lastre di vetro , pettine e distanziali .
2

Mettere il piatto più grande su una superficie asciutta e pulita . Mettere distanziali su entrambi i lati e coprire con piatto più piccolo . Allineare con cura i piatti con i distanziali su due lati e il fondo . Bloccare i tre lati delle piastre per sigillare e tenerli insieme .
3

Calcolare la quantità di volume di gel necessaria per il formato delle lastre e lo spessore dei distanziali .
4

Determinare per cento della soluzione di poliacrilamide necessari per l'esperimento . Per 100 ml di un gel di poliacrilammide all'8% , 26,6 mL della miscela del 29 % più 1 % acrilammide N , N - Methylenebisacrylamide , 52,7 mL di acqua , 20 ml di TBE 5X e 0,7 ml di 10 % di ammonio persolfato in una fiaschetta . Aggiungere 35 microlitri di TEMED alla soluzione e mescolare delicatamente . Lavorare velocemente dopo l'aggiunta TEMED . Riempire una siringa con la soluzione e dispensare accuratamente il contenuto nello spazio vuoto tra le piastre fino soluzione è leggermente inferiore piastra più piccola .
5

Inserire delicatamente il pettine ben formando tra le piastre grandi e piccoli sulla parte superiore della le piastre assemblate . Lasciate che il gel polimerizzare completamente per circa un'ora .
6

Rimuovere delicatamente il pettine . Lavare i pozzetti con 1X TBE per pulirli . Togliere i morsetti e posizionare il gel nell'apparato elettroforesi secondo le istruzioni del produttore. Il gel di poliacrilammide è pronto per l'uso per l'esperimento.