Come risolvere il processo di elettroforesi

elettroforesi è un metodo di separare frammenti di DNA o di proteine ​​in base alle dimensioni . Il gel viene posto in una scatola elettroforesi e sottoposto a cariche opposte . DNA porta una carica negativa uniforme , e quindi migra naturalmente verso carica positiva e lontano da cariche negative . Frammenti più piccoli migrare ulteriormente perché hanno un tempo più facile la manovra attraverso la matrice del gel . Le proteine ​​non hanno spese o forme uniformi , e quindi devono prima essere sottoposti ad un detergente , come la SDS , o dodecil solfato di sodio . Il detersivo srotola le proteine ​​e dà loro una uniforme charge.Things negativi che ti serviranno
attrezzature e standard di elettroforesi reagenti
macchina PCR reazione a catena della polimerasi o di amplificazione microbica vettoriali
SDS - PAGE reagenti standard

Mostra Altre istruzioni
Risoluzione dei problemi del DNA o delle proteine ​​elettroforesi
1

lavare accuratamente le attrezzature elettroforesi . Eseguire nuovamente l'esperimento . Se questo risolve il problema , allora l'apparecchiatura o guanti del tecnico possono essere stati contaminati da un enzima che degrada e il prodotto , o un'altra sostanza che inibisce le reazioni .
2

Se l'esperimento fallisce di nuovo , eseguire un altro gel elettroforesi elettroforesi utilizzando attrezzature diverse . Se questo risolve il problema , poi scarta l'apparecchiatura difettosa .
3

Se l'esperimento ancora non funziona quindi eseguire nuovamente l'esperimento con diversi reagenti , quali buffer , poliacrilammide , colorante e così via . Se questo risolve il problema , uno dei reagenti elettroforesi possono essere stati contaminati o altrimenti difettosa

procedure specifiche per il DNA o proteine ​​
4

Ripetere le procedure - . PCR , amplificazione batterica , ecc - che ha prodotto il campione di DNA , in primo luogo , se hai trovato un gel vuoto . Se hai trovato le bande della taglia sbagliata , quindi ripetere la procedura di digestione ; per esempio , l'uso di enzimi di restrizione per isolare il frammento di DNA desiderato ; giuntare il plasmide ricevente , se prevista e legare i prodotti . Se questo produce i risultati corretti , quindi il problema era con le procedure che hanno prodotto il campione di DNA ; non con il gel elettroforesi .
5

Ripetere l'esperimento utilizzando DNA uncut . Se questo produce i risultati previsti , allora il problema era con gli enzimi o procedure di digestione .
6

Ripetere le procedure come la lisi cellulare , e così via , che hanno prodotto il campione di proteine ​​, in primo luogo , se hai trovato un gel vuoto .
7

Se hai trovato bande proteiche della taglia sbagliata , quindi ripetere i passaggi SDS , avendo cura di riscaldare il campione per consentire l' SDS di legare . Se questo produce i risultati corretti , quindi il problema era con le procedure che hanno prodotto il campione , non con il gel elettroforesi .
8

ripetere l'esperimento senza l' SDS . Se questo produce i risultati previsti , allora il problema era con le procedure SDS o associati .