GTE buffer utilizza

esperimenti Biotecnologia coinvolgono l'estrazione del DNA da plasmidi richiedono l'uso di un buffer chiamato glucosio - Tris - EDTA , abbreviato come GTE . Questo tampone è una soluzione contenente glucosio sterile , tris ( idrossimetil ) ammino metano e tetraacetico etilendiammina . Cellule batteriche isolate sono risospese in tampone GTE prima di essere lisate per raccogliere il DNA plasmidico che contengono. Soluzione GTE tampona il terreno di isolamento , aiuta a mantenere osmolarità e si lega cationi bivalenti che possono interferire con l'isolamento process.Maintains Osmolarità

Se le cellule lyse prematuramente durante il processo di isolamento del DNA , che porta alla degradazione della DNA e ha un effetto negativo sul rendimento . Il tenore di glucosio in tampone GTE aiuta a mantenere osmolarità del terreno di isolamento . Come risultato , la concentrazione di soluto all'esterno delle cellule plasmide imita da vicino che all'interno delle cellule e impedisce la rottura . A differenza di altri sali con proprietà simili , il glucosio non è un elettrolita e quindi non causa un cambiamento nella capacità di tamponamento della soluzione .

Buffer isolamento Medie

Tamponi sono soluzioni che resistono piccole variazioni di pH della miscela di reazione . In esperimenti di biotecnologia coinvolgono isolamento del DNA da plasmidi , è importante mantenere il pH della soluzione a 8,0 . Questo pH è ideale per prevenire il DNA plasmidico da degradazione per idrolisi acida . Inoltre inibisce altre reazioni indesiderabili all'interno componenti cellulari che possono interferire con la stabilità del DNA . Tris ( idrossimetil ) amino metano aiuta a mantenere il livello di pH desiderato .
Vincola cationi bivalenti

Alcuni enzimi nucleasi presenti all'interno della cellula hanno il potenziale di degradare DNA . Questi enzimi richiedono la presenza di cationi bivalenti come calcio , zinco e magnesio come cofattori per realizzare le reazioni di degradazione . L' EDTA presente nel buffer GTE lega questi cationi bivalenti . Questo impedisce l'azione degli enzimi nucleasi e aiuta a ottenere DNA intatto al termine del processo di isolamento .
Uso GTE

GTE è disponibile come soluzione sterile grado biotecnologia. Si tratta di un liquido incolore con un pH di 8,0 e deve essere conservato freddo . Assicurarsi di scaldare il tampone a temperatura ambiente prima di aprire il contenitore . Seguire la tecnica asettica quando si maneggia questo buffer per prevenire la crescita di batteri nel terreno di isolamento . Studiare l'uso in sicurezza le istruzioni del produttore prima di utilizzare questa soluzione .