Come identificare mutazioni in gel elettroforesi

Elettroforesi su gel è un componente importante della biologia molecolare , in quanto consente all'utente di visualizzare DNA e RNA , che sono i materiali genetici della vita . Gli scienziati utilizzano questa tecnologia per studiare la genetica in innumerevoli modi , e in quasi tutti gli esperimenti che coinvolgono il materiale genetico . Essa prevede l'esecuzione del materiale genetico attraverso una matrice solida che permette al materiale genetico di separare secondo diverse proprietà come la dimensione e charge.Things elettrici che ti serviranno
gel di agar ( noto anche come agarosio )
macchina Elettroforesi
Buffer loading causa
Pipette e suggerimenti
controllo Ladder
campione di DNA purificato ( che contiene solo 1 sezione DNA noto)
Mostra Altre istruzioni
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Creare la matrice del gel seguendo le istruzioni sulla confezione del supporto in gel . La maggior parte dei gel sono realizzati tra 0,7 % e 2% agarosio . La concentrazione di agar estremità inferiore darà una buona separazione dei frammenti di DNA tra 5 e 10kb , mentre un gel 2 % mostra una buona separazione dei frammenti più piccoli (0,2 - 1kb ) . Quando l'agarosio si raffredda a appena sopra indurimento , aggiungere bromuro di etidio al gel ad una concentrazione di 10mg/ml . Agitare per mescolare prima di versare , facendo attenzione a non creare bolle. Accertarsi di inserire i pettini mentre il gel è morbido in modo che i pozzi vengono creati per i campioni di DNA . Lasciate indurire il gel per almeno 30 minuti prima di caricare i campioni .
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Fai soluzione tampone . Un tampone standard per elettroforesi su gel è Tris - borato - EDTA , che può essere preparata sciogliendo 218g Tris base, acido borico e 110g 9.3g EDTA in 1.9L di acqua distillata . Utilizzare NaOH per regolare accuratamente il pH a 8,3 . Questo dà una soluzione 10X . Diluire a fare una partita di soluzione 0.5x da utilizzare nella macchina elettroforesi .
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Posizionare il gel nella macchina elettroforesi , e coprire con una soluzione tampone .
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Mix 2 - . . 4μL di ogni campione di DNA con circa 5 ml di colorante
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carico prima bene con il pennarello e tintura
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iniziano con il secondo pozzo , iniziare a caricare ogni campione . Terminate con la corsia finale caricato con lo stesso marcatore .
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Chiudere la macchina gel e accendere l'alimentazione . Attivare il gel a 5V/cm .
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Spegnere fonte di alimentazione durante il caricamento colorante ha raggiunto vicino all'altro lato del gel . Fare attenzione a monitorare il gel in modo che il carico colorante non gocciola l' altra estremità del gel .
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Rimuovere il gel dal serbatoio e vista in una stanza buia sotto una luce UV .

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noti l' indicatore sulla scala che è la dimensione del frammento di DNA wild-type (non mutato ) dovrebbe essere . Se il campione è puro , la banda corrispondente dei campioni è il wild-type e di tutte le altre bande rappresentano mutanti .