Che cosa fa Acetone Alcool fare per una colorazione di Gram

Il colorazione di Gram è una procedura colorazione differenziale che mostra che i batteri sono Gram - positivi o Gram -negativi in base al loro colore macchia. Alcool acetone è un reagente utilizzato in questo processo per fornire la differenziazione di colore . Batteri Gram-positivi avere uno strato peptidoglicano spesso e macchia viola , mentre i microrganismi Gram- negativi hanno poco o nessun strato di peptidoglicano e macchia rosa . Primary Stain -Crystal Violet

Una volta una diapositiva di campione batterica viene preparato , cristallo viola è usato per macchiare il campione in primo luogo . A questo punto i batteri sia Gram -positivi e Gram - negativi appariranno viola . Solitamente il violetto cristallo viene applicato sul vetrino per 30 secondi prima di lavare via qualsiasi macchia in eccesso con acqua . La viola cristallo può aderire un po 'per gli strati peptidoglicani quindi non tutti la macchia primaria sarà lavato con l'acqua .
Mordente - Iodio

Lo iodio viene quindi aggiunto al campione per un minuto . Esso agisce come mordente , che serve a fissare coloranti in un processo di colorazione . Iodio esegue questa funzione legandosi al violetto cristallo e creando un complesso insolubile che aderisce molto meglio strato di peptidoglicano spessore trovato cellule batteriche Gram - positivi che la semplice violetto cristallo sola . Non c'è una fase di lavaggio con acqua dopo aver aggiunto lo iodio .
Decolorizer - Alcohol

Sia acetone o alcool etilico può essere utilizzato come agente decolorante . L' alcol dissolve grassi della membrana cellulare esterna dei batteri Gram - negativi , permettendo il complesso iodio - violetto cristallo la fuoriuscita dello strato di peptidoglicano sottile . L' alcol è aggiunto per 10 a 20 secondi ; si versa sulla diapositiva fino a quando tutto lo iodio viene lavato via e il run- off è incolore . A questo punto del processo di colorazione di Gram , i batteri Gram - negativi sono incolori mentre i batteri Gram - positivi ancora mantengono il violetto cristallo . Una volta terminato il vetrino deve essere risciacquato con acqua per fermare l'effetto decolorante .
Di contrasto - Safranin

Safranin viene aggiunto per aumentare la visibilità ed il contrasto al incolore batteri gram-negativi . La macchia rende questi batteri appaiono rosa al microscopio . Poiché la macchia viene aggiunto tutto il campione , colora anche i batteri Gram - positivi e , ma più scuro del violetto cristallo nasconde l'accendino safranina colore rosa . Una volta che il campione diapositiva è stata inondata di safranina per circa un minuto , l'acqua viene utilizzata per lavare la macchia in eccesso che non aderiscono alle cellule batteriche .