Come preparare un cocktail inibitore della proteasi

Gli inibitori della proteasi sono enzimi che inibiscono l'azione di proteasi , che sono alcuni enzimi che uccidono le proteine ​​all'interno delle cellule . Ci sono diverse proteasi che colpiscono proteine ​​differenti . Pertanto, per mantenere la funzionalità delle proteine ​​dopo la lisi cellulare , una combinazione , o un cocktail di inibitori delle proteasi viene utilizzata . Questi sono disponibili in soluzione , tablet o in polvere form.Things che ti serviranno
PMSF
Bestatin
Aprotinin
leupeptina
Pepstatin
EDTA pH ~ 8
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inibitori della proteasi
1

Fai Aprotinin , leupeptina e Pepstatin a concentraions archivi di 100um ( micromolar ) .

Aprotinin è disponibile in forma di soluzione ad una concentrazione magazzino di 100 mm .

Per fare 1 ml ( millilitri) di 100um , sciogliere 1UL ( microlitro ), in 999ul della PBS 1X ( fisiologica soluzione tampone ) .

leupeptina è disponibile come polvere . Peso molecolare di leupeptina è 475,6 . Sciogliere 100UG ( microgrammi ) di polvere in 2 ml di acqua per fare scorta di concentrazione 100um .

Per rendere Pepstatin , sciogliere 100UG di pepstatina polvere in 1,45 ml di acqua per fare una concentrazione scorta di 100um .

Tutti questi possono essere mescolati tra loro o conservati individualmente a meno 80 gradi Celsius.
2

Marca PMSF ( Phenylmethyl sulfonyl fluoruro ) a magazzino 100 mm. PMSF si presenta sotto forma di polvere . Il peso molecolare di PMSF è 174,19 . Sciogliere 10 mg di PMSF in 572 ul del 100 per cento di etanolo e conservare a 4 gradi Celsius. E ' sensibile alla luce e deve essere conservato nel buio .

Questo si aggiunge al buffer di lisi poco prima dell'uso .
3

Mescolare le proteasi insieme alle concentrazioni richieste . Generalmente sono diluiti di un fattore 100 per l'uso .