Come identificare un carboidrato Attraverso Bradford reagente

Le macchie sono a disposizione per identificare i quantitativi ei tipi di carboidrati in una soluzione . Reagente di Bradford , tradizionalmente , viene utilizzata solo per quantificare la quantità di proteine ​​in soluzione . Tuttavia, ci sono due casi specifici in cui si può usare il reagente di Bradford per identificare i carboidrati : quando i carboidrati sono in forma di glicoproteine ​​- in altre parole , zuccheri legati alle proteine ​​- e quando si conosce la soluzione consiste interamente uno dei carboidrati o proteine ​​, e vuole confermare non contiene proteins.Things che ti serviranno
piastre di saggio
spettrofotometro
kit di colorazione Bradford
movimentazione dei materiali di laboratorio liquido standard
Mostra Altre istruzioni
Quantificare glicoproteine ​​
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Warm up lo spettrofotometro lasciando in posa per almeno 15 minuti prima di iniziare ad usarlo .
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preparare piccoli campioni hanno conosciuto concentrazioni di glicoproteine ​​o " standard noti . " Inizia la tua concentrazioni alto come 100 microgrammi di glicoproteine ​​per millilitro ( ml) di acqua distillata , e per ogni livello successivo , diluire la concentrazione della metà ; cioè 50 microgrammi /ml , 25 microgrammi /ml .
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Aggiungi Bradford colorante reattivo e blu brillante G dal vostro kit saggio Bradford a ogni standard conosciuto . Lasciare riposare e reagire per cinque minuti .
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Preparare il campione per il quale si desidera quantificare la concentrazione glicoproteina . Il campione dovrebbe contenere tra i cinque ei 100 microgrammi di glicoproteina per ml . Aggiungi Bradford colorante reattivo e brillante blu G.
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Posizionare la piastra di dosaggio contenente le norme e le incognite di uno spettrofotometro . Per gli standard , ottenere una curva di taratura , grafica assorbanza contro concentrazione nota . Questa curva , per l'intervallo di concentrazioni usate come citato in precedenza , dovrebbe essere lineare . Calcolare un'equazione lineare per descrivere la curva .
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Collegare i valori di assorbanza per il campione noto nell'equazione lineare ottenuto nel passaggio precedente . Calcolare la concentrazione glicoproteina per il campione .
Utilizzo di Branford reagente per confermare una soluzione consiste di carboidrati
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Aggiungi Bradford tintura e blu brillante G al campione sconosciuto nel piastra di test .
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Aggiungi Bradford tintura e blu brillante G ad un altro pozzetto della piastra di dosaggio , senza l'aggiunta di soluzioni note o sconosciute .
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Leggere la piastra di saggio allo spettrofotometro , a 465 e 595 nm . Il pozzo contenente solo colorante Bradford e Blu Brillante G dovrebbero avere picco di assorbanza - la lunghezza d'onda in cui l'assorbanza è massima ; questo sarà visualizzato dal software spettrofotometro automaticamente - . 465

Per il campione sconosciuto , se contiene proteine ​​, il picco massimo di assorbanza avverrà a 595 nm . Se , invece , il campione è costituito principalmente da carboidrati , proteine ​​e non , come il pozzo contenente solo colorante Bradford e blu brillante G , il suo picco di assorbanza avverrà a 465 nm .