BL21 è un ceppo del batterio Escherichia coli comunemente usato nella ricerca di biologia molecolare . Questo ceppo può produrre elevate quantità dell’enzima neuronali ossido nitrico sintasi , che catalizza la produzione di ossido nitrico da arginina . Secondo gli Atti della National Academy of Sciences ( PNAS ) , è intrigante che un semplice organismo procariotico come E. coli ha la capacità di esprimere un enzima di mammifero complesso come nNOS . BL21 è prodotto mediante ingegneria genetica , e le sue trasformazioni protocolli spesso avvengono tramite shock termico o elettroporazione , una tecnica che altera il campo elettromagnetico nella soluzione cella . Trasformazione cellulare Protocollo

Tecnici posto le cellule in ghiaccio per 10 minuti. Poi , aggiungono quattro microlitri di DNA nella soluzione di cellule e mescolare bene con un puntale . Hanno posto la soluzione di back in ghiaccio per 30 minuti , shock termico le cellule utilizzando un 107,6 gradi Fahrenheit bagno d’acqua per 45 secondi , e poi rimesso in ghiaccio per altri due minuti. Infine , i tecnici diffondere la soluzione di cellule su piastre di medie Kan LB , e incubare a 98,6 gradi Fahrenheit per 6 ore . Espressione della proteina è indotta mediante isopropil- beta- D – 1 – thiogalactopyranoside .

BL21 trasformazione mediante elettroporazione Protocolli

Tecnici preparare un mezzo di coltura cellulare senza siero e valutare la redditività prima all’esecuzione elettroporazione , utilizzando trypan macchia blu seguita da osservazione al microscopio . I campioni vengono posti in un apparato chiamato elettroporatore . Secondo Martin J. Tymms in ” Fattore protocolli di trascrizione “, come tensione aumenta , diminuisce la vitalità cellulare . Le condizioni di elettroporazione che riducono la vitalità del 50 per cento sono anche le condizioni in cui l’espressione genica raggiunge il massimo . ” Espressione genica ” si riferisce alla produzione di proteine ​​specifiche , in base alle relative segmenti di DNA .

Inserimento di CITS e trasformazione di cellule BL21

Questo protocollo prevede la trasformazione di E. coli BL21 , coltivato in brodo Luria a 98,6 gradi Fahrenheit . Vettore citrato ( CITS ) sono state espresse in E. coli BL21 aggiungendo la carbenicillina chimica a concentrazione di 100 mg per ml . Attività di trasporto citrato nei ceppi ricombinanti è stato rilevato come aloni blu intorno colonie su Simmons piastre di agar citrato . Attività di fosfatasi alcalina è stato rilevato come colonie blu su piastre di brodo Luria agar contenenti il substrato cromogeno 5 -bromo -4 -cloro – 3 – indolil fosfato ( sale toluidina; XP) . Ad una concentrazione di 40 mg per ml