Praticamente tutto il DNA è composto da quattro basi : adenina (A ) , citosina ( C ) , guanina ( G ) e timina ( T ) . Questo notevole coerenza tra le specie permette di geni da un organismo a essere tagliati e incollati nel genoma di un altro organismo . Ad esempio , geni delle proteine ​​fluorescenti medusa sono stati introdotti in batteri, che poi producono la proteina . I plasmidi contenenti il DNA di altre specie sono chiamati plasmidi ricombinanti . Selezione Gene

Il primo passo nella produzione di un plasmide ricombinante è identificare quale gene o geni di introdurre in un plasmide preesistente . Oltre al gene ( s ) di interesse , un gene indicatore viene scelta per differenziare le cellule ricombinanti da cellule non- ricombinanti in successive fasi del processo . Il gene indicatore più comune è un gene di resistenza agli antibiotici non originaria delle specie ospiti in modo che solo le cellule ricombinanti avranno il gene di resistenza agli antibiotici conferito dal plasmide .

Selezione sito

enzimi di restrizione tagliano il DNA solo in sequenze specifiche . Alcuni producono cosiddetti estremità “appiccicosi” , in cui un filamento è qualche paia di basi più lungo dell’altro , mentre altri producono estremità smussate , in cui entrambi i filamenti sono tagliati nella stessa posizione . Mappe di restrizione che mostrano tutti i siti di taglio enzimi di restrizione noti sono disponibili per molti plasmidi . Utilizzando queste mappe , gli scienziati scelgono siti di restrizione compatibili in plasmide e su entrambi i lati dei geni di interesse , al fine di tagliare i geni del loro DNA nativo e fare aperture per loro nel plasmide .

enzimi di restrizione

enzimi di restrizione è il processo di incubazione del DNA da tagliare con le adeguate enzimi di restrizione . Poiché il DNA desiderato è ora mescolato con ritagli di altro DNA , gli scienziati utilizzano gel elettroforesi per separare i frammenti dalle dimensioni e isolare il DNA desiderato . Questo è seguito da legatura , in cui le estremità dei geni selezionati si uniscono con le estremità del plasmide . Il plasmide ricombinante ora contiene i geni di interesse e il gene di resistenza agli antibiotici .

Amplification

Amplification è la copia di massa di materiale genetico . Nel caso di un plasmide ricombinante , il plasmide viene introdotto in cellule batteriche . Non tutte le cellule saranno assumere con successo in un plasmide così le cellule vengono quindi coltivate su terreni contenenti un antibiotico che è letale per batteri non ricombinanti . Poiché le cellule ricombinanti hanno il gene di resistenza agli antibiotici conferito dal plasmide , solo essi sopravvivere e moltiplicarsi . Le cellule sono poi lisate , o rotti , e il DNA viene estratto e purificato .