Nitroblue tetrazolium , o NBT , è un prodotto chimico usato in biochimica e immunologia nella rilevazione di un enzima chiamato fosfatasi alcalina . Gli scienziati utilizzano il composto a condizioni diagnosi del sistema immunodefense , come la malattia granulomatosa cronica . BCIP acronimo di fosfato 5 – bromo-4 -cloro – 3 – indolile . Questo composto chimico è spesso usato in combinazione con NBT per rilevare fosfatasi alcalina attraverso una serie di protocolli . BCIP /NBT fosfatasi alcalina soluzione di substrato

Durante questo protocollo , gli scienziati preparare una soluzione con BCIP , NBT , levamisolo e il buffer enzima fosfatasi alcalina a pH 9.5. Tampone AP contiene tris ( idrossimetil ) amminometano , cloruro di magnesio , il detergente Tween polisorbato 20 e cloruro di sodio . La soluzione viene incubata a temperatura ambiente per 24 ore ed è quindi disponibile per l’uso .

Rilevamento di mRNA con fosfatasi alcalina

rilevamento di mRNA con fosfatasi alcalina è un protocollo utilizzato per studiare l’ mRNA acidi nucleici e DNA in embrioni animali . Durante questa procedura , BCIP /NBT viene utilizzato come substrato per l’ enzima fosfatasi alcalina . BCIP /NBT viene aggiunto ai embrioni dopo che sono risciacquati due volte in tampone alcalino fosfatasi colorazione . Siti acidi nucleici appaiono in viola .

Elettroforesi e Western Blot

Durante questo protocollo , i tecnici separare e identificare i componenti delle proteine ​​utilizzando apparecchiature gel elettroforesi e di un tecnica chiamata Western blotting , che richiede l’uso di un apparecchio contenente una membrana di nitrocellulosa e anticorpi specifici . Dopo elettroforesi standard tecnici eseguono il protocollo Western blotting , incubando le membrane per 30 minuti in una soluzione tampone ed a temperatura ambiente . L’anticorpo p47 – phox viene aggiunto e incubato per un’ora . Viene aggiunto anticorpo coniugato con fosfatasi alcalina , e dopo un’ora , anche BCIP /NBT . La reazione viene arrestata dopo 15 minuti di incubazione sciacquando la membrana con acqua .

Isolamento e differenziazione delle cellule Medaka

Medaka è un piccolo pesce che produce uova ogni giorno e è ampiamente utilizzato nella ricerca sulle cellule staminali embrionali . Secondo Kursad Turksen in “Protocolli embrionali cellule staminali : isolamento e caratterizzazione , ” Medaka uova vengono incubate in un mezzo embrione a 78,8 gradi Fahrenheit per sette giorni . Gli embrioni vengono lavati in soluzione salina tamponata con fosfato , fissato in una miscela metanolo – acetone e colorati con BCIP /NBT . I campioni vengono quindi tenuti al buio per 24 ore a 82,4 gradi Fahrenheit . Le cellule cromosomi vengono poi osservati sotto un microscopio .