coltura tissutale è il processo mediante il quale le singole cellule sono coltivate in un ambiente di laboratorio , a parte dell’organismo hanno avuto origine da . Coltura tissutale è usato per propagare linee cellulari e mantenere la crescita delle cellule in modo che le condizioni sperimentali possono essere testati . Studenti e tecnici di laboratorio sono più comunemente assegnato questo compito , perché è abbastanza facile da fare . Se un laboratorio è abbastanza grande , ci sarà una persona incaricata di coltura di cellule così la contaminazione può essere evitato . Tipi di cellule e linee
cellule usate per la coltura sono descritti da origine e le modalità di crescita. Cellule primarie provengono direttamente da un organismo vivente e possono provenire da qualsiasi organo . Queste cellule sono difficili da coltivare perché hanno limitata capacità di dividersi , rendendo la loro vita abbraccia breve . Linee cellulari finiti vengono anche direttamente da tessuti animali e sono difficili da propagare . Queste cellule possono essere coltivate su più generazioni, e così durano più a lungo linee primarie dirette . Linee cellulari continue provengono da un’azione denominata trasformazione con cui le loro genetica hanno spontaneamente cambiato nella cultura . Queste cellule sono facili da propagare perché hanno una durata di vita quasi indefinita , tuttavia , non sono qualità di rappresentante dell’organismo originale a causa di questo cambiamento .
Ottenere cellule Stock
cellule primarie devono provenire direttamente dal organismo vivente . Ad esempio , se si stanno studiando le ghiandole mammarie del mouse , il mouse deve essere sacrificato , il tessuto mammario isolato , e le cellule separate e cresciuto in piatti di coltura . Questo è costoso e richiede tempo ma darà un’indicazione più accurata dell’applicazione vita reale . La maggior parte delle cellule piastrate dopo l’isolamento moriranno entro 48 ore di coltura tanti topi sono necessari per ottenere un gran numero di piatti sani . Se non avete l’animale necessaria per ottenere cellule , si dovrà ricercare un altro laboratorio che sta lavorando sullo stesso tipo di progetto e vedere se possono risparmiare alcune cellule per voi . Le linee cellulari possono essere ordinati presso aziende fornitrici biologici o ottenuti da un altro laboratorio che si lavora.
Coltura di cellule
Il metodo di coltura cellulare sarà diverso per ogni tipo di cellula; tuttavia, ci sono alcune regole generali per imparare ad avere successo . La maggior parte delle cellule sono conservati congelati in modo che il primo compito è quello di scongelare le cellule fuori. Se si dispone di pile è imperativo che si impara a loro la cultura da un’altra persona che è molto esperto in quella particolare linea cellulare . Le linee cellulari di solito sono dotati di un protocollo da seguire. Cellule congelati devono essere scongelati a 37 gradi C bagnomaria rapidamente al fine di prevenire la morte cellulare inutili . Inoltre , i mezzi di crescita che viene utilizzato nelle piastre dovrebbe essere riscaldato prima dell’uso . Dopo lo scongelamento , trasferire le cellule ad una capsula di Petri con la quantità prescritta di terreni nutritivi e incubare per 24 ore. Questo periodo di tempo permette alle cellule di aderire al fondo del piatto in modo che il supporto può essere rimosso il giorno dopo e sostituita con mezzi freschi .
Osservazione e manutenzione
Monitorare le cellule giornalmente , cercando in loro sotto il microscopio . Cercare segni di insufficienza , come molti mosche volanti . Floater sono cellule morte che non sarà più aderire al fondo della piastra . Utilizzare la punta di aspirazione nella cappa coltura tissutale per evacuare i media e le cellule morte e quindi aggiornare con i nuovi media. Le cellule sane dovrebbero replicare e diffondere man mano che maturano in incubatrice . Quando il fondo della piastra è quasi completamente ricoperto di cellule , è il momento di dividerli . Ogni laboratorio avrà uno specifico protocollo da seguire ma generalmente questa viene svolto da lavare le cellule con una soluzione tampone e poi distacco delle cellule dal fondo della piastra utilizzando mezzi e una pipetta o raschiatura . Se si utilizzano supporti , quindi riempire la pipetta con mezzi e premere con forza verso il basso sul fondo della piastra e rilasciare il liquido . L’alluvione del liquido dalla pipetta rimuovere le cellule e sospenderle nei media . Se raschiando , utilizzare il raschietto cella indicata nel protocollo di sospendere le cellule. Trasferire questa cella supporti sospesa a nuovi piatti che sono stati preparati in precedenza e incubare per 24 ore . Se vi trovate con troppi piatti pieni di cellule , essi devono essere utilizzati o congelati .
Contaminazione
La contaminazione è un problema serio in coltura . Molte settimane di duro lavoro può essere rovinato con l’introduzione di batteri in incubatrice . Segni di contaminazione nella vostra cultura tessuto includono supporto nuvoloso, l’osservazione di cellule agglomeranti sotto il microscopio , la morte inspiegabile , o un odore insolito . Eseguire sempre la vostra cultura tessuto sotto una cappa a flusso d’aria laminare progettato appositamente per l’attività. Non utilizzare una bottiglia di supporto per più di una linea cellulare . Non avere due diversi tipi di cellule sotto il cofano allo stesso tempo . Idealmente , non si dovrebbe nemmeno avere più di un tipo di cellula in ogni incubatrice , ma questo a volte può essere poco pratico . Se si deve condividere , mantiene piatti più lontano possibile tra loro e sempre assicurarsi che il proprio incubatore è pulito .