Per molte applicazioni biologiche e cliniche , è necessario determinare la concentrazione cellulare in un campione . Esistono diversi metodi stabiliti per determinare la concentrazione cellulare , che includono diluizione seriale , densità ottica e conteggio manuale con un emocitometro . Qualunque di questi metodi possono essere utilizzati per determinare le concentrazioni di campioni biologici o effettuare emocromo da campioni clinici . Contando Camera

camera di conteggio in grado di determinare la concentrazione di cellule in una sospensione liquida . Questo dispositivo è anche noto come un emocitometro , come è stato originariamente progettato per contare il numero di cellule del sangue in un campione clinico . I campioni vengono caricati in un pozzo , posti sotto una lente microscopica e le cellule sono contate manualmente contro uno sfondo contrassegnato con una griglia a forma di V . In breve, le cellule in diverse piazze della griglia sono contati e la dimensione totale del campione possono essere calcolati per l’intero volume .

Diluizione seriale

genere , culture può contenere milioni di cellule per millilitro . In una diluizione seriale , una determinata quantità di sospensione cellulare viene rimosso da un tubo contenente la concentrazione iniziale e trasferito in un’altra provetta caricata con un volume predosata di liquido . Ad esempio, rimuovere uno mL dalla provetta e posizionate in una seconda provetta contenente nove mL del solvente liquido . Ciò rappresenta una diluizione di dieci volte . Ripetere questo processo fino a un numero limitato di celle sono disponibili per essere contati con un emocitometro .

Densità ottica

luce diminuisce man mano che passa attraverso qualsiasi mezzo , ad esempio una sospensione liquida contenente cellule . Sulla base di questa caratteristica , è possibile misurare le cellule dalla densità ottica ( OD ) , o il cambiamento di luce emessa e rilevato . La quantità di luce diffusa dalla sospensione cellulare , misurata in un apparato chiamato spettrofotometro , può essere interpretato rappresentare concentrazione cellulare . Le letture sono determinate a determinate lunghezze d’onda , misurata in nanometri (nm) , e sono riportati , per esempio , come OD a 600 nm . La lettura OD è inversamente proporzionale alla concentrazione . In altre parole , minore è la lettura OD , maggiore è la concentrazione cellulare .

Microscopia

Utilizzando un microscopio per determinare la concentrazione cellulare è piuttosto laboriosa e spesso imprecisa . Concentrazioni cellulari devono prima essere diluito con il metodo della diluizione seriale spiegato in precedenza . Un volume noto della soluzione cellulare viene poi montato su un vetrino e le cellule vengono contati manualmente contro una griglia di acquisire una stima del campione . Quando si utilizza questo metodo , è importante mantenere il campione ben miscelato in modo che le cellule non si depositano sul fondo della provetta . In questo caso , ci sarà una grande discrepanza nel numero di cellule dallo strato superiore del campione rispetto a livelli inferiori .