elettroforesi su gel è usato nei laboratori per ordinare e misurare proteine ​​o acidi nucleici . Dopo un’accurata preparazione, i campioni vengono caricati in una estremità del gel , una corrente elettrica viene applicata , e campioni correre verso il polo positivo del vassoio . Come con qualsiasi procedura scientifica , la possibilità di errore umano e di altre fonti di errore esiste e deve essere preso in considerazione quando si interpretano i risultati . Esempio di contaminazione

Guanti aiuterà a proteggere voi ei vostri campioni .

Qualsiasi cosa si sta misurando , il primo passo per ottenere risultati accurati è un campione incontaminato . Adottare misure per prevenire la contaminazione durante la preparazione indossando i guanti , utilizzando solo contenitori sterili , e cambiare il vostro puntale dopo ogni utilizzo . Inoltre, fare attenzione a non contaminare il pipetta tirando il campione oltre la punta .

Gel Problemi

misurazioni accurate e la giusta concentrazione per il vostro gel sono fondamentali .

Molti errori derivare da problemi con il gel . In primo luogo, una concentrazione di gel non corretto può provocare campioni esecuzione troppo rapidamente o per niente . Assicurarsi che si sta utilizzando una concentrazione che viene misurato correttamente e orientata verso le dimensioni generali del campione che si sta tentando di misurare . Per esempio, quando si guarda a un campione di DNA , un gel 0,7 per cento consentirebbe di ordinare in modo efficace i frammenti che sono ovunque da 800 a 10.000 coppie di basi lunghi , considerando che i frammenti più piccoli da richiedere un gel percentuale più elevata .

Gel può essere compromessa in altri modi . Prima di caricare i vostri campioni , assicurarsi che il gel non ha tagli o bolle. Anche una piccola imperfezione può influenzare i risultati. La corretta preparazione del gel è la chiave . Seguire tutte le istruzioni , versare lentamente per evitare bolle, e lasciate che i vostri gel raffreddare completamente prima di caricare i vostri campioni . La matrice molecolare del gel stesso e la capacità del campione di navigare attraverso questa matrice al fine carica positiva del vassoio sono ciò dimostra dimensione del campione . Una rottura fisica o anche una temperatura che è troppo estremo interesserà questa matrice molecolare e compromettere la validità dei dati .

Infine , quando si imposta il vostro gel potrete inserire un pettine per creare i pozzi dove potrete caricare la vostra campioni. Fate attenzione che questo pettine è posizionato correttamente nella inserti della barra , perché un pettine che crea pozzi che sono troppo profonda o superficiale può portare a errori . Il pettine non dovrebbe raggiungere completamente attraverso il gel al fondo del vassoio , ma dovrebbe creare pozzi abbastanza in profondità per caricare i campioni senza traboccare.

Improprio Loading

Anche se sembra abbastanza semplice , caricare i campioni nei pozzetti del gel può rivelarsi difficile. Più importante , assicurarsi di sapere quanto di mettere in ciascun pozzetto . Troppo del campione potrebbe causare a striscio o sembrare più piccolo di quello che realmente è; troppo poco del campione può essere impossibile da vedere . Inoltre, non forare il gel quando si caricano i campioni , perché questo può causare problemi , proprio come altre imperfezioni gel .

Elettriche Problemi attuale

Steer chiaro di tensione è troppo alta .

Un errore comune per i nuovi studenti alla tecnica di elettroforesi su gel è in esecuzione il gel all’indietro . Ciò accade quando i poli positivo e negativo sono fissati alle estremità sbagliate del vassoio . È possibile evitare questo errore , ricordando che il campione sarà sempre eseguito al rosso , in modo da assicurarsi che il polo positivo è attaccato sul lato opposto del vassoio dai pozzetti del campione .

Problemi si verificano anche con l’uso di non corretto tensione . Una tensione che è troppo alta può causare il campione scappare l’ altra estremità del gel , mentre uno che è troppo basso può significare il campione vorrà troppo tempo per correre o non correre abbastanza lontano da quantificare utilmente . Posizionamento non corretto del vassoio all’interno della corrente o interruzioni nella corrente può causare il campione di correre in diagonale o in modo incoerente , che può rendere difficile una misurazione precisa .

Visualization Impossibile

Se non riesci a vedere i risultati , ovviamente, avrete difficoltà a interpretare . Un campione che è troppo piccolo può essere difficile da visualizzare . Problemi con i metodi di visualizzazione possono anche compromettere i risultati . I metodi più comuni utilizzano coloranti visibili o bromuro di etidio ( per la visualizzazione sotto la luce ultravioletta ) . Questi devono essere aggiunti al gel alle concentrazioni corrette , o la visualizzazione possono essere ostacolati .

Vario misura

La precisione delle vostre misure sarà influenzato dai vostri strumenti.

misura varia è una fonte ampiamente accettato di errori in elettroforesi su gel che gli studenti spesso si affacciano . Quando si misura la lunghezza del gel che il campione ha viaggiato , il righello sarà limitato in termini di precisione , probabilmente un millimetro . Quando la misura sembra essere tra millimetri , non sarà in grado di specificare la misura esatta . Inoltre , le bande costituite mediante elettroforesi possono variare in spessore . Lo si misura nella parte superiore o inferiore della fascia in ogni colonna ? Coerenza è importante , ma misura al bordo della banda più lontano dal pozzo è più comune . Tenete a mente che questa fonte di errore anche probabile influenzato la vostra quantità di campione e le concentrazioni di altri componenti nel vostro esperimento .