Gli anticorpi sono molecole prodotte dai globuli bianchi , chiamati cellule B , contro diversi antigeni . Gli antigeni sono molecole che sono estranei al proprio corpo . Le tue cellule B possono rispondere a un antigene e produrre un anticorpo specifico contro di essa . Gli anticorpi sono importanti molecole del sistema immunitario e aiutano ad eliminare gli agenti patogeni che causano malattie e le tossine dal vostro corpo . Gli anticorpi possono essere effettuate in un laboratorio e utilizzati in molte applicazioni mediche e scientifiche . Più comunemente , questi anticorpi sono prodotti in un topo o un ratto contro un antigene specifico . È possibile sviluppare un anticorpo contro un antigene con poche steps.Things impegnative che ti serviranno
Antigen
Mouse
Le cellule del mieloma
terreno di coltura e di altri prodotti chimici
tessuti piastre di coltura ed altre attrezzature di laboratorio
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Preparare giusta quantità di antigene si vuole fare l’anticorpo contro Altre istruzioni
. Il tuo antigene può essere una cellula intera , una proteina o una molecola di carboidrato . Secondo un articolo pubblicato in ” Patologia Molecolare ” , 50-100 mcg di proteine o dieci milioni di cellule , dovrebbe essere sufficiente a immunizzare un topo . Si potrebbe anche necessario utilizzare un adiuvante , soprattutto se il antigene è scarsamente immunogenico
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Iniettare proteine per via sottocutanea – . Sc – e le cellule intraperitoneale – IP – nel mouse . Dare una iniezione di spinta dopo pochi giorni o settimane e seguire le titoli anticorpali con coda sanguina. Una volta che è possibile rilevare titoli anticorpali , rimuovere le cellule B della milza mouse utilizzando metodi asettici e crudeli.
Sims 3
fondere la milza B – cellule di topo con cellule di mieloma negativi , istocompatibili HGPRT , miscelando le cellule con un agente di fusione , come polietilene glicole . I risultanti B – cellule di mieloma – milza sono chiamati ibridomi o cellule ibride .
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Piastra le cellule ibride nel tessuto pozzetti di coltura e iniziare a selezionare contro le cellule di mieloma non fuse . Utilizzare un terreno selettivo contenente ipoxantina , aminopterina e timidina , noto anche come HAT . Tutte le cellule del mieloma non fuse moriranno durante questa selezione e solo il ibridoma o anticorpo cellule che secernono sopravviverà.
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Esaminare le cellule in crescita con un microscopio e registrare scarsa crescita , ibridomi emergenti e affermati . Una aver stabilito linee cellulari di ibridoma , trasferirli grande piastra di coltura tissutale . Entro 30 giorni , cambiare il supporto HAT di HT mezzo per terminare il processo di selezione .
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Schermo ibridomi stabilite per la produzione di anticorpi mediante test ELISA e continuare con una linea cellulare che mostra la più alta produzione di anticorpi . Cyropreserve anche i vostri migliori produttrici di linee cellulari di ibridoma e conservare in azoto liquido
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purificare il vostro anticorpo dal mezzo di crescita mediante una cromatografia di affinità come la proteina A cromatografia liquida ad alte prestazioni – . . HPLC