elettroforesi è un fenomeno in cui le particelle cariche migrano in presenza di un campo elettrico . I biologi usano elettroforesi per separare e identificare molecole biologiche quali proteine , acidi nucleici e aminoacidi che esistono sia come anioni o cationi . Diversi fattori , come la dimensione e la forma molecolare , il pH del mezzo elettroforetica e le caratteristiche del campo elettrico applicato , influenzano la migrazione di tali frazioni cariche . Caratteristiche molecolari
La dimensione e la forma delle molecole biologiche influenza la loro tasso di migrazione . Come proteina aumenta di dimensioni , la sua velocità di migrazione diminuisce a causa di forze di attrito nel mezzo tampone elettroforetico . Proteine globulari mostrano un tasso di migrazione diverso da quello delle proteine fibrose . Carica di una molecola dipende dalla sua dissociazione al pH della soluzione tampone utilizzata . Come carica aumenta di una molecola , il suo tasso di migrazione aumenta anche .
Buffer Immobili
Gli ioni del buffer utilizzato nella corsa elettroforetica conducono la corrente applicata tra il catodo e anodo . Le proteine nel campione interagiscono con gli ioni nel buffer a seconda del pH del tampone . Questa interazione influisce sulla velocità di migrazione delle molecole proteiche . Buffer con elevate forze ioniche causano un aumento di corrente , che produce una maggiore quantità di calore e la riduzione del tasso di migrazione proteina . Tamponi con bassissima forza ionica portano a problemi di diffusione delle proteine ; questo compromette la separazione delle bande elettroforetiche .
campo elettrico Caratteristiche
La migrazione delle proteine dipende dalle caratteristiche del campo elettrico che viene applicato al campione disperso nel buffer . Per una determinata tensione , la corrente che passa attraverso il mezzo elettroforetica dipende dal gradiente potenziale e la resistenza del mezzo . Come aumenti potenziali gradiente , la migrazione delle proteine accelera . Poiché la lunghezza del mezzo elettroforetico proteine che attraversano aumenta, proteine incontrano maggiore resistenza . Ciò ostacola la migrazione delle proteine .
Effetti della temperatura
Il tempo impiegato per la separazione dei componenti del campione è proporzionale alla tensione applicata al mezzo . Un aumento della tensione aumenta la velocità di migrazione . Tuttavia , alte tensioni generano una quantità eccessiva di calore . Aumento della temperatura altera la viscosità e la conducibilità elettrica del mezzo elettroforetico . Questo influenza il tasso di migrazione pure. Variazioni di temperatura possono causare un cambiamento nella conformazione delle proteine , che riduce la velocità di migrazione e l’efficienza della separazione elettroforetica .