aerogenes e altre specie di Enterobacteriaceae sono facili da identificare con il kit API – 20E . Questo kit , prodotto da bioMeriuex Inc. , comprende 20 mini tubi o pozzetti per il test . La prova consiste inoculando una sospensione batterica pura nei pozzetti e leggendo le reazioni cromatiche che si verificano . Identificazione basa sulla conversione dei risultati di queste reazioni colore in un codice a sette cifre noto come indice analitico profilo . Abbinamento questo codice con il database del fabbricante fornisce una identificazione dei organism.Things che ti serviranno
Enterobacter aerogenes pura cultura
fiala contenente 5 ml di sodio cloruro 0,85 per cento medio
Pipetta
incubazione box
demineralizzata o distillata
olio minerale
Incubatore telefono
toni
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Isolare l’organismo si desidera identificare su una cultura specifico mezzo per Enterobacteriaceae . Utilizzare il kit API 20E solo con colture pure e non direttamente su campioni mixed – cultura .
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Aprire una fiala contenente 5 ml di sodio cloruro 0,85 per cento medio . Rimuovere una singola colonia da un 18 – a 24 ore -old piastra di isolamento con una pipetta , e aggiungerlo nella fiala . Mescolare per ottenere una sospensione omogenea . Con tale sospensione non appena finisci prepararla.
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Creare una casella di incubazione che si compone di pozzi a nido d’ape in un cassetto dotato di coperchio . Aprire la scatola , e aggiungere 5 ml di acqua demineralizzata o distillata nei pozzetti del vassoio . Disimballare la striscia fornita nel kit API 20E , e inserire nella casella di incubazione .
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Riempire il tubo e il riccio dei pozzi contrassegnati ” GEL “, ” VP ” e ” CIT ” con la sospensione che hai preparato. Nei restanti pozzetti , riempire la sospensione batterica nel tubo ma non il riccio . Aggiungere olio minerale nei pozzetti contrassegnato ” ADH , ” ” ODC “, ” LDC “, ” URE ” e ” H2S ” per creare un ambiente anaerobico .
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Coprire la casella di incubazione con il coperchio , e incubare a una temperatura compresa tra 34 e 38 gradi centigradi per 18 a 24 ore.
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Osservare i pozzi , e notare le reazioni sul foglio dei risultati . Fornite un minimo di tre test sono positivi , procedere alle reazioni di colori utilizzando le soluzioni di test chimici o reagenti , fornito con il kit. Aggiungere una goccia di reagente TDA nel pozzo marcato ” TDA ” e una goccia di VP1 e VP2 reagenti in ben marcato ” VP “. Se meno di tre prove è uscito positivo , incubare le strisce per altre 24 ore prima di aggiungere questi reagenti .
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Osservare i cambiamenti di colore prodotte nei pozzetti . Un colore marrone rossastro in TDA indica una reazione positiva . Attendere 10 minuti dopo l’aggiunta dei reagenti del kit in VP1 e VP2 . Si consideri un colore rosso o rosa come positivo e un colore rosa pallido che appare dopo 10 minuti negativi.
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Aggiungi una sola goccia di JAMES reagente del kit di prova per il ben marcato ” IND . ” Si consideri un colore rosato nell’intera riccio come una reazione positiva .
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Eseguire il test ossidasi come specificato dal produttore del kit , e registrare i risultati insieme con i risultati delle prove precedenti 20 .
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Utilizzare la tabella lettura fornito con il kit di assegnare valori per le reazioni osservate in ciascuno dei pozzetti . Aggiungi questi valori come prescritto per ottenere il numero di profilo a sette cifre .
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feed questo numero di profilo a sette cifre nel database del produttore del kit tramite un telefono a toni . Attendere per ricevere l’identificazione fornito dal database . Se il numero di profilo non fornisce risultati specifici , eseguire le prove supplementari specificati dal produttore del kit .