Quando fare ricerca con cellule animali viventi , è molto importante monitorare la salute della popolazione cellulare . Dopo tutto, è lo scopo della maggior parte della ricerca cella per determinare l’effetto di alcuni trattamenti o organismi microbici su cellule vive . Si può determinare la percentuale complessiva di cellule vitali in coltura utilizzando una tecnica chiamata Trypan Blue conteggio esclusione . Trypan Blue è un colorante che viene assorbito solo da cellule morte , così quando viene aggiunta ad un campione di cellule solo quelli morti diventano blu . Da lì è solo una questione di contare le cellule e calcolando i percentages.Things che ti serviranno
popolazione cellulare
Microscopio ottico
Trypan blu
Micropipetter
emocitometro
copertura di slittamento
Mostra Altre istruzioni
preparare le cellule per la visualizzazione
1
Utilizzare un micropipetter per mescolare 100 microlitri di sospensione cellulare con 100 microlitri di Trypan Blue colorante .
2
Aggiungere 25 microlitri della miscela risultante per ciascuno dei pozzetti sul tuo emocitometro .
3
Posizionare la polizza di copertura sopra i pozzetti del emocitometro .
Eseguire Cell Count
4
Posizionare il emocitometro sul microscopio a luce e vista a 100 ingrandimenti .
5
contare il numero di chiari e cellule viventi in uno spazio millimetro di un quadrato delimitato sul tuo emocitometro . Contare il numero totale di celle nello stesso spazio . Dividere il numero di cellule vive per il numero totale di cellule e moltiplicare per 100 per determinare la percentuale di cellule che sono vitali .
6
Ripetere il passaggio precedente per diversi spazi millimetri più one- quadrati . Calcolare la percentuale media praticabile sommando i calcoli percentuali risultanti e dividendo per il numero totale di calcoli . Questo numero deve essere un giusto stima della percentuale totale di cellule della popolazione che sono vitali .