Quando fare ricerca con cellule animali viventi , è molto importante monitorare la salute della popolazione cellulare . Dopo tutto, è lo scopo della maggior parte della ricerca cella per determinare l’effetto di alcuni trattamenti o organismi microbici su cellule vive . Si può determinare la percentuale complessiva di cellule vitali in coltura utilizzando una tecnica chiamata Trypan Blue conteggio esclusione . Trypan Blue è un colorante che viene assorbito solo da cellule morte , così quando viene aggiunta ad un campione di cellule solo quelli morti diventano blu . Da lì è solo una questione di contare le cellule e calcolando i percentages.Things che ti serviranno

popolazione cellulare

Microscopio ottico

Trypan blu

Micropipetter

emocitometro

copertura di slittamento

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preparare le cellule per la visualizzazione

1

Utilizzare un micropipetter per mescolare 100 microlitri di sospensione cellulare con 100 microlitri di Trypan Blue colorante .

2

Aggiungere 25 microlitri della miscela risultante per ciascuno dei pozzetti sul tuo emocitometro .

3

Posizionare la polizza di copertura sopra i pozzetti del emocitometro .

Eseguire Cell Count

4

Posizionare il emocitometro sul microscopio a luce e vista a 100 ingrandimenti .

5

contare il numero di chiari e cellule viventi in uno spazio millimetro di un quadrato delimitato sul tuo emocitometro . Contare il numero totale di celle nello stesso spazio . Dividere il numero di cellule vive per il numero totale di cellule e moltiplicare per 100 per determinare la percentuale di cellule che sono vitali .

6

Ripetere il passaggio precedente per diversi spazi millimetri più one- quadrati . Calcolare la percentuale media praticabile sommando i calcoli percentuali risultanti e dividendo per il numero totale di calcoli . Questo numero deve essere un giusto stima della percentuale totale di cellule della popolazione che sono vitali .