Come calcolare RNA Concentrazione

Quantificazione vostro campione di RNA misurando la sua assorbanza di luce ultravioletta ( UV ) . Uno spettrofotometro nano -drop utilizzerà solo uno o due microlitri di campione , che è possibile recuperare . Altri spettrofotometri richiedono un campione molto più grande . Il coefficiente di estinzione di nucleotidi alla lunghezza d'onda UV di 260 nm in un percorso ottico di 1 cm è 20 basata su questo coefficiente di estinzione , l'assorbanza di 40 & micro ; g /ml di RNA nelle stesse condizioni è uno . Utilizzando queste informazioni , è possibile calcolare la concentrazione del vostro RNA sample.Things Hai bisogno
Spettrofotometro
Calculator

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Fai una diluizione , se necessario , del campione . Una diluizione standard per un microcuvette è 1:40. Rendere questa diluizione con l'aggiunta di 2 & micro ; L campione di RNA a 78 & micro ; . L acqua sterile
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Seguire i protocolli del vostro particolare spettrofotometro per calibrare la macchina utilizzando una vuota e quindi determinare la densità ottica del campione ad una lunghezza d'onda UV di 260 nm
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Moltiplica l'assorbanza del campione dal fattore di diluizione di 40 & mu ; . g di RNA /mL . L'equazione potrebbe essere: " concentrazione di RNA ( & micro ; g /ml ) = ( OD260 ) x (fattore di diluizione ) x (40 & micro ; g di RNA /ml ) /( 1 OD260 unità ) " ( Hofstra.edu ) Ad esempio : Se si diluito il campione da 01:40 e la vostra lettura di assorbanza era 0,08 , si dovrebbe moltiplicare 0,08 x 40 x 40 = 128 & micro ; g /ml = 0.13 & micro ; g /& mu ; L
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capire la purezza del campione prendendo un altro assorbanza alla lunghezza d'onda 280 nm lettura UV . Il rapporto OD 260 /OD 280 indicherà se - e in quale misura - il campione è contaminato con proteine ​​o fenolo . Un risultato di 1,8-2,0 indica RNA qualità .