Come combinare le parti di due diverse strutture proteiche

È possibile cross-link , o causare legami chimici per formare tra due differenti strutture proteiche . La reticolazione può fornire informazioni sulle identità di due proteine ​​differenti , e anche le regioni in cui si formano legami . Il processo di reticolazione è piuttosto semplice , coinvolgendo trattamento proteine ​​in soluzioni tampone con agenti reticolanti che legame ai gruppi funzionali delle proteine ​​. La misura in cui una legami proteici ad un agente di reticolazione , inducendo cambiamenti conformazionali nella proteina , fornisce informazioni preziose nel numero di siti di legame che le proteine ​​e qual reattivo le proteine ​​sono agents.Things legame che ti serviranno
soluzione tampone , cioè tampone fosfato a pH 7,5
provette Eppendorf
glutaraldeide , o un altro agente di cross-linking di scelta
Micropipette
Tris- HCl
Mostra Altre istruzioni

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Creare una soluzione di volume totale di circa 100 microlitri . Pipette da 50 a 100 microgrammi di proteine ​​interagenti in una Eppendorf contenente 20 mM tampone fosfato .
2

Aggiungere 5 microlitri di 2.3 per cento glutaraldeide , via pipettaggio , per 2-5 minuti. Incubare la soluzione a 37 gradi Celsius.
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Terminare la reazione di reticolazione aggiungendo , via pipettaggio , 10 microlitri di 1 M Tris - HCl , pH 8.0 .