? Clonazione TA è un metodo semplice e conveniente di subclonaggio polymerase chain reaction ( PCR ) prodotti . “TA ” è l’abbreviazione di ” timina ” e ” adenina “. Questa tecnica di clonazione utilizza la capacità di timina di ibridarsi adenina in presenza di ligasi . Gli enzimi di restrizione non vengono utilizzati , a differenza del metodo subcloning tradizionale. Invece, i prodotti di PCR vengono amplificati usando Taq polimerasi enzimi . Metodo
Il metodo di clonazione TA usa l’attività transferasi terminale di certo acido desossiribonucleico (DNA ) polimerasi , come la Taq polimerasi . Taq polimerasi enzimi non hanno alcuna attività di revisione e preferenzialmente aggiungono una singola , tre prime- A ( 3′ -A) sbalzo ad ogni estremità del prodotto della PCR .
Un vettore di clonazione linearizzato con il singolo , tre prime- T ( 3′ – T ) sporgenze chiamate T – vettore è usato per clonare il prodotto di PCR in un vettore plasmidico . Il prodotto di PCR è mescolato con questo vettore in alta quota .
DNA ligasi ( ligasi T4 ) è aggiunto alla miscela , che permette ai due prodotti di ibridare e unisciti .
Vantaggi e clonazione Svantaggi
TA è un metodo conveniente di subcloning prodotti di PCR nel vettore linearizzato , ed è molto più semplice e veloce rispetto ai metodi tradizionali subcloning . Poiché questo metodo non utilizza enzimi di restrizione , prodotti privi di siti di enzimi di restrizione possono essere clonati .
Uno svantaggio è che i kit di clonazione TA sono molto costosi e , quindi , il loro uso è limitato . Inoltre , non vi è alcuna clonazione direzionale; così la probabilità di clonazione in una direzione opposta è maggiore .
TA Cloning Kit
Diversi produttori vende kit di clonazione TA . Alcuni sono Invitrogen , QIAGEN e Premier Biosoft .