Come migliorare gel filtrazione

filtrazione gel è una tecnica cromatografica che viene utilizzata per separare le molecole in una miscela sulla base delle dimensioni delle particelle . Quando un campione viene applicato ad una colonna impaccata con il mezzo di filtrazione su gel , le molecole più piccole si muovano nei pori del mezzo filtrante . Molecole che sono più grandi di queste dimensioni dei pori non possono diffondersi nel terreno e passare attraverso la colonna , che appare per primo nel liquido eluito dalla colonna . Risoluzione - il grado di separazione dei componenti della miscela - dipende da diversi fattori , come il volume del campione , la natura della colonna filtrazione e la sua gamma frazionamento . Istruzioni
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Seleziona un mezzo di filtrazione appropriato a seconda della natura del campione . Scegli multimediale con una vasta gamma di frazionamento che attraversa i pesi molecolari dei componenti presenti nel campione . Se molti media hanno gamme di frazionamento simili , selezionare quello con la curva di selettività più ripida per raggiungere la migliore risoluzione .
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Utilizzare più colonne binate in una serie per aumentare l' altezza del letto efficace . Questo assicura una separazione più efficiente , ottenute tutte le colonne contengono lo stesso mezzo di separazione .
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Determinare il volume esatto campione da utilizzare . Generalmente , questo non deve essere superiore a 2 per cento del volume totale della colonna . Inizia con un volume di 0,5 per cento e di effettuare corse di prova ad aumentare i volumi di campione per trovare il valore che produce la migliore risoluzione . Evitare di usare volumi di campione di meno di 0,5 ml per bassi volumi compromettono risoluzione.
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Concentrare i campioni prima di applicarle alla colonna di gel filtrazione . Questo migliora il grado di separazione ; tuttavia , assicurarsi di utilizzare concentrazioni inferiori a 70 mg /ml, con campioni di proteine ​​per evitare interferenze dovute agli effetti della viscosità .
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Degas buffer è necessario utilizzare la separazione da essi filtrando sotto vuoto . Se bolle d'aria entrano nella colonna di filtrazione , influenzano le prestazioni della colonna .
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Utilizzare la portata più bassa possibile per evitare allargamento dei picchi . Picchi di massima forniscono risultati che non sono così precisi come quelli stretti .