Per capire le basi molecolari e biochimici di crescita e divisione cellulare , è necessario studiare il ciclo cellulare meccanismi regolatori . Gli studi del ciclo cellulare riguardano principalmente la sincronizzazione o il coordinamento di cellule ad una fase specifica . Sincronizzazione cellulare è un metodo per portare cellule in fasi diverse di una particolare fase di divisione cellulare . Ci sono molti metodi stabiliti dagli scienziati in laboratorio per sincronizzare cellule a fasi specifiche del ciclo cellulare . I metodi più comuni sono deprivazione di siero di cellule per un periodo di tempo o l’uso di agenti farmacologici come nocodazole . Uno di questi metodi porta le cellule arrestarsi una specifica fase del ciclo cellulare . Istruzioni
Siero fame
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Piatto vostre cellule a regolare terreno di coltura cellulare integrato con il 10 per cento di siero fetale bovino per 12 a 14 ore e lasciare che le cellule attaccano alla cultura piatti di tessuto.
2
volta che le cellule hanno attaccato , rimuovere il supporto e lavare le cellule con 10 ml di soluzione tampone fosfato .
3
Aggiungi nuovi media di crescita integrato con 0,2 per cento del feto siero bovino per 16-48 ore . Il periodo di tempo dipende dal tipo di cellule che si sta utilizzando . Alcune cellule richiedono meno tempo, mentre altri richiedono più tempo . Questa fase è il periodo di deprivazione di siero .
4
Dopo il periodo di tempo impostato è finito , sciacquare le cellule di nuovo con 10 ml di soluzione tampone fosfato .
5
Sostituire l’ terreni di crescita vecchi integrato con siero bovino fetale al 10 per cento . Le cellule sono ora sincronizzati e sono pronti per l’esperimento .
Nocodazole trattamento
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Piatto vostre cellule in normale terreno di coltura cellulare integrato con siero fetale bovino 10 per cento per 12 -14 ore e lasciare che le cellule attaccano ai piatti di coltura di tessuti .
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Togliere la carta e lavare le cellule con 10 ml di soluzione tampone fosfato .
8
Aggiungi mezzi di crescita regolare, integrato con il 10 per cento di siero fetale bovino e 100ng/ml dei nocodazole alle cellule per 12 ore a 37 gradi Celsius incubatore .
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osservare le cellule al microscopio dopo 12 ore di trattamento . Le cellule devono essere rastrellando e ottenere staccati dal piatto di coltura .
10
Raccogliere le cellule toccando il piatto cultura e pipettando il mezzo su e giù parecchie volte . Trasferire il terreno contenente le cellule in una provetta di polipropilene da 50 ml .
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Centrifugare le cellule a 100 xg per 10 minuti . Scartare il surnatante . Lavare le cellule in 10 ml di soluzione tampone fosfato e centrifugare di nuovo a 100 xg per 10 minuti .
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Sospendere le cellule nel mezzo di crescita regolare, integrato con siero bovino fetale al 10 per cento . Le cellule sono pronte per l’esperimento .