High Performance Liquid Chromatography ( HPLC ) è un tipo di cromatografia su colonna per separare e classificare i componenti di un campione basato sulle sue interazioni con una colonna specifica . HPLC è distinto perché utilizza un ambiente più pressurizzato per spingere i campioni liquidi attraverso la colonna densamente imballato in modo più efficiente . Tre tipi di colonne HPLC sono di uso comune oggi; differiscono per la natura del materiale di imballaggio rivestimento sulla colonna e interagendo con il campione . Colonna di scambio ionico

sperimentatori utilizzano scambio ionico cromotografia quando la separazione di campioni ionizzabili , o campioni che possono diventare carica. La fase stazionaria , che è il materiale solido rivestimento sulla colonna e interagendo con il campione , possiede una carica opposta a quella del campione di interesse , in modo che il campione sarà attratto alle pareti della colonna . Questa attrazione rallenta il tempo di eluizione , o il tempo necessario per passare fino in fondo alla colonna nella fase mobile , del campione . I più cariche le particelle del campione sono, più attratti saranno alla fase stazionaria , risultando in un tempo di eluizione più lenta . I tempi di eluizione rappresentano la forza della carica delle particelle , e quindi sono il mezzo principale di classificazione dei diversi composti all’interno del campione .

Adsorbimento Colonna

indica il suo nome , le funzioni di adsorbimento cromatografia attraverso una fase stazionaria assorbente . Adsorbimento , da non confondere con l’assorbimento , coinvolge il legame temporaneo delle particelle del campione alla fase stazionaria della colonna . Il grado in cui una particella campione può adsorbire alla fase stazionaria è determinato dalla polarità relativa, o carica , che la particella può possedere in un dato momento . Questo varia da cromatografia a scambio ionico dal fatto che le particelle non sono esplicitamente pagano , anzi sono leggermente positivo o negativo a volte come la rotazione delle particelle e vibra . Come la particella si muove lungo la colonna , si adsorbe e – adsorbe de a vari livelli in base al livello di polarità possiede . Tempi di eluizione forniscono una misura del livello di polarità delle particelle del campione .

Dimensione Esclusione Colonna

Size- Exclusion Chromatography utilizza una tecnica di separazione diversa da quella di scambio ionico o cromatografia di adsorbimento . Questo tipo di colonna è meno comune rispetto agli altri due , ma è utile quando la separazione grandi biomolecole come proteine ​​o carboidrati . La fase stazionaria è costituita da particelle non cariche , che sono di dimensione controllata e poroso . Quando il campione viene sparato attraverso la colonna , le particelle più piccole dimensioni, sono temporaneamente assorbiti nel rivestimento colonna , mentre le particelle più grandi passano dritto e eluiscano prima . La fase stazionaria è progettato in modo che la piccola è la particella , il più in profondità nel rivestimento colonna penetra , il che significa che le particelle più piccole prenderanno il più lungo del tempo di ri – superficie ed eluire . I campioni possono essere classificati in base al tempo di eluizione , che corrisponde direttamente alla dimensione delle particelle .