cultura Tissue si riferisce in generale alla crescita e il mantenimento delle cellule animali al di fuori del suo ospite originale . Si tratta di una parte cruciale della biologia molecolare e permette di comprendere una serie di meccanismi di malattia . Le colture cellulari sono mantenuti in terreni di coltura cellulare contenente micro- nutrienti macro e necessari per la crescita , sali inorganici per regolare il pH e antibiotici per limitare la contaminazione . Cultura del tessuto è condotta in cappe a flusso laminare appositamente progettati , e superfici di lavoro sono sterilizzata per ridurre il rischio di contaminazione . Ricostituzione

Durante la ricostituzione , un flaconcino di cellule viene rimosso dal magazzino e posto in un incubatore o bagnomaria a 37 ° C per 1-2 minuti. Si fa attenzione a non incubare il flaconcino per troppo tempo per evitare danni alle cellule. Le cellule sono poi centrifugati per rimuovere il supporto di memorizzazione , ri- sospeso in terreni di coltura pre -riscaldato e trasferito in un vaso di crescita , dove è incubato a temperatura ottimale , di solito 37 gradi F.

Nozioni di base Sub – coltura

Sub – coltura è fatto per aumentare la quantità di cellule pur mantenendoli in fase di log di crescita . Le cellule crescono esponenzialmente , a seconda della quantità di spazio disponibile . Una volta che lo spazio è massimizzata , le cellule raggiungono una fase denominata piena confluenza , in cui le cellule proliferano più e cominciano a morire . Sub – coltura varia leggermente in base al tipo di cellula e tasso di crescita .

Sub – coltura Procedura

cellule aderenti sono attaccati al fondo del recipiente crescita , e vengono rimossi dopo decantazione supporti esauriti , meccanicamente mediante raschiatura , o con enzimi come la tripsina , che stacca cellule dalla superficie . Al contrario , linee cellulari continue circolano all’interno del terreno di coltura e sono separati durante la centrifugazione . Le cellule vengono centrifugati per rimuovere tripsina e dei media . Le cellule vengono poi raccolti in un pellet e risospeso in coltura . Una piccola porzione della risospensione è macchiato con Trypan Blue colorante , contato , e valutati per la vitalità , sia manualmente utilizzando un microscopio e emocitometro , o da un contatore di cellule automatizzato . Secondo le esigenze dei tassi di crescita e di laboratorio , una concentrazione cellulare specifico è posto in un recipiente di crescita contenente il volume appropriato di terreni di coltura fresco .

Bagagli

colture cellulari sono memorizzato in entrambi azoto liquido o in un congelatore a seguito -130 gradi Celsius . Dispositivi di protezione è necessaria quando si posiziona o si rimuove cellule da azoto liquido . Una concentrazione nota di cellule vitali è sospeso in supporti di memorizzazione come il dimetil solfossido ( DMSO ) e glicerolo , trasferito in un pallone di stoccaggio adeguato e posto in azoto liquido o un congelatore . La velocità di raffreddamento è controllato da unità elettroniche di congelamento o contenitori pieni di alcool per garantire calo di temperatura non è troppo drastico per causare danni alle cellule .